物質(zhì)的吸收光譜本質(zhì)上就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長(zhǎng)的光能量，相應(yīng)地發(fā)生了分子振動(dòng)能級(jí)躍遷和電子能級(jí)躍遷的結(jié)果。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu)，其吸收光能量的情況也就不會(huì)相同。因此每種物質(zhì)就有其*的、固定的吸收光譜曲線，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長(zhǎng)處的吸光度的高低判別或測(cè)定該物質(zhì)的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎(chǔ)。分光光度分析就是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。

　　紫外分光光度光度法的定量分析基礎(chǔ)是朗伯-比爾(Lambert-Beer)定律。即物質(zhì)在一定濃度的吸光度與它的吸收介質(zhì)的厚度呈正比。

　　紫外分光光度計(jì)的主要校正內(nèi)容介紹：

　　1.吸光度校正

　　校正吸光度常用一很純物質(zhì)一定濃度的溶液為標(biāo)準(zhǔn)，且此溶液的吸光度系數(shù)經(jīng)不同實(shí)驗(yàn)室核對(duì)，為了使標(biāo)準(zhǔn)液吸光度不受測(cè)定波長(zhǎng)的微移動(dòng)而有改變，常選擇具有較平滑吸收高峰的物質(zhì)，同時(shí)要求溶液穩(wěn)定，且在相當(dāng)?shù)牟ㄩL(zhǎng)范圍內(nèi)吸收度的改變符合Lambert-Beer定律，常用硫酸銅、硫酸銨鈷和硝酸鈉或鉀的溶液。鉻酸鉀溶液是常用的標(biāo)準(zhǔn)溶液，此溶液在紫外區(qū)和可見區(qū)均適用。

　　2.波長(zhǎng)或波數(shù)校正

　　可用具有窄吸收帶的溶液，濾光片或蒸氣來校正所需要的光波范圍。如果要求很高的精密度時(shí)，可用放電燈泡發(fā)射的射線來校正。有的光譜儀其上已裝有一個(gè)為校正用的燈。苯的蒸氣對(duì)校正一定范圍的波長(zhǎng)亦很有用，可用一小滴苯放于1cm厚的吸收杯中，測(cè)其吸收波長(zhǎng)，在遠(yuǎn)紫外區(qū)可用氧氣的吸收帶進(jìn)行校正。用各種稀土金屬的濾光片，可以很快地校正波長(zhǎng)，但準(zhǔn)確度不如上述方法高。常用含有鈥和釹、鐠離子的濾光片。

　　3.雜散光校正

　　小量的雜散光往往會(huì)引起較大的測(cè)量誤差，它的校正可用一個(gè)能*吸收某一波長(zhǎng)單色光，且在其他波長(zhǎng)吸收很弱的溶液。從這個(gè)溶液所表現(xiàn)的透光情況可推測(cè)雜散光的近似值。由雜散光帶來的偽吸收帶，亦可用Lambert-Beer定律來檢查，但用此定律檢查偽吸收帶誤差較大。由切斷范圍之外所表現(xiàn)的透射比可得出近似的雜散光百分?jǐn)?shù)。若所含雜散光大于0.1%，應(yīng)設(shè)法減低，或?qū)y(cè)得的吸收光度進(jìn)行校正。由雜散光引起的誤差與雜散輻射成正比，因此校正值很容易從化合物的近于正確的曲線計(jì)算而得。此外還可用一個(gè)適當(dāng)?shù)臑V光片，該濾光片在測(cè)定波長(zhǎng)范圍內(nèi)*透光，但吸收此范圍外的光波，由此來消除雜散光。